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        深圳支原體DNA提取常見問題

        來源: 發(fā)布時間:2024-01-11

        核酸提取效果不好,多加點磁珠?有很多實驗者喜歡在提取效果不佳的時候,增加磁珠的用量,認為磁珠多加一點,就能吸上更多的核酸,不得不說這種想法是不可取的。過多的磁珠將因為無法均勻分散于液體中,而喪失其分散的特性,也使得洗滌過程中無法充分增加核酸磁珠和液體接觸的效率。而且過多的磁珠也會吸附更多的雜質,對除雜效果影響很大。甚至有些時候,過多的磁珠會吸附蛋白酶、溶菌酶等在液體體系中起主要作用的功能成分,導致整個試劑盒效率低下。有很多時候,在提取效果不佳的時候,減少磁珠使用量,反而是提升提取效果的途徑。很多實驗人員在篩選試劑過程中都是在已經(jīng)成熟磁珠體系下,簡單地等量替換試劑,用于比較試劑效果。這樣就會很容易得出某種試劑效果不好的結論,但實際上,由于不同試劑適合的體系和用量是不同的,往往需要調整過后才能獲得更好的提取效果。總而言之,在使用磁珠進行核酸提取時,合適的試劑配合適量的磁珠,才能達到好的核酸提取效果。核酸提取的質量要求。深圳支原體DNA提取常見問題

        磁珠法核酸提取常見問題之磁珠結塊:導致磁珠結塊的可能原因:①磁珠吸附了過多雜質,包括蛋白、脂質、多糖等;②磁珠粒徑太小;③洗滌完畢,乙醇干燥時間過長。④磁珠磁吸附時間過長;⑤操作中途含磁珠的樣品管離心速率過高、離心時間過長;磁珠結塊的解決辦法:①優(yōu)化裂解液、結合液配方,將雜質裂解并充分消化;②選擇粒徑較大的微球;③縮短干燥時間;④控制磁珠吸附時間,磁分離時,待液體變澄清即可將液體吸棄,并及時將EP管從磁力架上取出;⑤操作過程中切勿高速或長時間離心;深圳支原體DNA提取常見問題南京正揚宿主細胞殘留核酸提取試劑盒的裝量是多少?

        磁珠法核酸提取產(chǎn)品,磁珠如何與核酸結合實現(xiàn)提取功能?核酸作為一種生物大分子,之所以能夠在水溶液中穩(wěn)定分散不沉淀,是由于三種非共價作用力的存在:(1)靜電相互作用(2)范德華力(3)氫鍵。核酸分子具有多個磷酸基團,呈現(xiàn)高度負電性,分子間互相排斥從而避免發(fā)生團聚。此外,核酸分子在水溶液中通過氫鍵與范德華力結合了大量的水分子在其周圍,形成一個水化層,也阻止了分子間的聚集。因此,要使得核酸分子結合到磁珠表面,就必須削弱上述作用力,屏蔽溶液中的靜電斥力,同時破壞核酸分子表面的水化層,使其能夠與磁珠表面相接觸,進而產(chǎn)生吸附。

        用qPCR法進行宿主細胞DNA殘留檢測時,哪些因素會對檢測結果的準確性和方法靈敏度存在較大影響?樣品核酸提取純化過程雜質干擾的去除對qPCR法宿主細胞殘留DNA檢測結果有著較大影響。樣品核酸提取純化操作步驟對DNA檢測結果的準確度影響較大,通常采用加樣回收試驗來進行驗證并確定可接受的偏離限度,內標回收率在50-150%的范圍內都可以接受。樣品提取步驟較為復雜,需要特別注意,操作不當不但可能影響回收率還可能引入環(huán)境污染。123磁珠法核酸提取流程。

        磁珠法核酸提取常見問題之核酸得率低:核酸得率低的可能原因:①磁珠吸附能力較弱,能結合溶液中少量的核酸;②磁珠洗脫方法不正確導致核酸洗脫效率較弱;③所使用的提取試劑(pH、鹽、醇)與該磁珠不匹配;④樣品對所用提取試劑有抑制;核酸得率低的解決辦法:①改變表面基團種類及密度;②減少洗脫前的干燥時間;③洗脫時將樣品至于56℃孵育,加熱促進核酸洗脫;④優(yōu)化試劑配方,使配方與所選磁珠相匹配;④更換與提取試劑匹配的磁珠;磁珠法核酸提取試劑盒。寧波RCL核酸提取操作流程

        磁珠法核酸提取試劑盒需要用磁力架嗎?深圳支原體DNA提取常見問題

        南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細胞殘留DNA提取試劑盒,應用于各種類型生物制品的中間品、半成品、原液、終產(chǎn)品樣本中提取微量的宿主細胞DNA。試劑盒采用特別修飾的氧化硅納米磁性微球在獨特緩沖體系和外加磁場的作用下,可從復雜生物樣本中提取微量DNA并純化得到高純度DNA。主要用于生物制品樣本中的微量DNA提取,滿足復雜基質(高蛋白、高鹽、低pH等)樣品的性能驗證要求,與本公司多種宿主細胞核酸定量檢測試劑盒和片段分析試劑盒配套使用。深圳支原體DNA提取常見問題