原代肝細(xì)胞也可以用于Organ-on-a-chip的構(gòu)建。Organ-on-a-chip是一項(xiàng)創(chuàng)新性的科技成果，它在載玻片大小的芯片上構(gòu)建了一個(gè)完整的生理組織微系統(tǒng)，其中包含有原代肝細(xì)胞、肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞、生物流體和機(jī)械力所需微環(huán)境的關(guān)鍵要素。這個(gè)微型肝臟模型可以在體外模擬人體肝臟的主要結(jié)構(gòu)功能特征和復(fù)雜的組織間聯(lián)系，為藥物藥效評(píng)價(jià)、藥物安全性評(píng)價(jià)、化妝品安全性評(píng)價(jià)、食品安全性評(píng)價(jià)、環(huán)境保護(hù)評(píng)價(jià)等提供了一種全新的方法和手段。 這個(gè)微型肝臟模型的研發(fā)，是在對(duì)傳統(tǒng)的肝臟模型進(jìn)行改進(jìn)和創(chuàng)新的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)的。傳統(tǒng)的肝臟模型通常是基于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法，但這些方法存在著很多的局限性和缺陷。例如，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)不僅存在著倫理和道德問題，而且還存在著種屬差異、生理反應(yīng)差異等問題；而體外細(xì)胞培養(yǎng)則存在著細(xì)胞失活、細(xì)胞分化等問題。因此，Organ-on-a-chip的出現(xiàn)，填補(bǔ)了這些傳統(tǒng)方法的空白，為科學(xué)研究和工業(yè)應(yīng)用提供了更加可靠和有效的手段。立沃生物原代肝細(xì)胞配套提供多種細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)定制服務(wù)，包括細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)等。東莞樹鼩原代肝細(xì)胞培養(yǎng)技巧

原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中去除endotoxin是十分重要的。原代肝細(xì)胞培養(yǎng)是一種常用的實(shí)驗(yàn)方法，但在培養(yǎng)過程中，細(xì)胞可能會(huì)受到endotoxin的污染，這會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 endotoxin是一種由細(xì)菌產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，可以引起炎癥反應(yīng)和細(xì)胞損傷。在原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中，endotoxin可能來自于培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)器具或細(xì)胞本身。因此，需要采取一些措施來去除endotoxin。 一種常用的方法是使用endotoxin去除劑，例如聚陽離子樹脂（Polyclonal Cationic Resin，PCR）或聚乙烯醇（Polyvinyl Alcohol，PVA）。這些去除劑可以吸附endotoxin，從而減少其對(duì)細(xì)胞的影響。使用endotoxin去除劑的方法比較簡(jiǎn)單，只需要將其加入培養(yǎng)基中，然后將細(xì)胞培養(yǎng)在其中即可。 可以使用endotoxin檢測(cè)試劑盒來檢測(cè)培養(yǎng)基中的endotoxin含量。如果檢測(cè)結(jié)果顯示endotoxin含量較高，可以考慮更換培養(yǎng)基或使用endotoxin去除劑。 除了使用去除劑和檢測(cè)試劑盒外，還可以采取一些預(yù)防措施來減少endotoxin的污染。例如，使用無菌技術(shù)操作、定期更換培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基、避免過度攪拌和振蕩等。 去除endotoxin是原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中必須注意的問題。采取適當(dāng)?shù)拇胧┛梢詼p少endotoxin的污染，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。佛山鴨原代肝細(xì)胞培養(yǎng)基提高原代肝細(xì)胞的活率需要綜合考慮多個(gè)因素：細(xì)胞培養(yǎng)條件、細(xì)胞來源、細(xì)胞分離方法、培養(yǎng)基成分等。

細(xì)胞密度差異會(huì)影響原代肝細(xì)胞的形態(tài)。通常情況下，肝細(xì)胞在高密度狀態(tài)下會(huì)呈現(xiàn)出多邊形的形狀，但是在低密度狀態(tài)下，它們的形態(tài)就會(huì)變得多樣化。有些肝細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)出梭形的形狀，有些則會(huì)呈現(xiàn)出五花八門的形態(tài)，甚至可能會(huì)出現(xiàn)其他奇怪的形狀。這是因?yàn)樵诘兔芏葼顟B(tài)下，肝細(xì)胞之間的距離較遠(yuǎn)，它們之間的相互作用力也會(huì)減弱，從而導(dǎo)致它們的形態(tài)發(fā)生變化。這種變化不只是形態(tài)上的變化，還可能會(huì)影響到肝細(xì)胞的功能和代謝活性。因此，在進(jìn)行肝細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，密度的控制是非常重要的，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要進(jìn)行調(diào)整，以保證肝細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和發(fā)育。

原代肝細(xì)胞體外培養(yǎng)一般培養(yǎng)在瓶皿等容器中，根據(jù)它們是否能貼附在支持物上生長(zhǎng)的特性，可分為懸浮型和貼壁型兩大類。 原代肝細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)時(shí)可以呈單個(gè)細(xì)胞或細(xì)小的細(xì)胞團(tuán)，胞體為圓形。其優(yōu)點(diǎn)是在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)，生存空間大，允許長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)，便于大量繁殖。正常貼壁原代肝細(xì)胞具有接觸抑制和密度抑制的雙重特性，細(xì)胞相互接觸后可抑制細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)，因此細(xì)胞不會(huì)相互重疊于其上面生長(zhǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)、匯合成片后，雖發(fā)生接觸抑制，但只要營(yíng)養(yǎng)充分，仍可增殖分裂，但當(dāng)細(xì)胞數(shù)量達(dá)到一定密度后，由于營(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，細(xì)胞分裂停止，稱為密度抑制。 當(dāng)肝細(xì)胞被分離后，可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞在開始的4~6h內(nèi)細(xì)胞色素P450酶的活性和體內(nèi)一致，隨時(shí)間的延長(zhǎng)而迅速下降，故懸浮肝細(xì)胞一般用于代謝穩(wěn)定性研究或代謝物譜研究。貼壁培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞有足夠的時(shí)間從損傷中恢復(fù)過來，保持了正常肝細(xì)胞的生物學(xué)特征及代謝活性，一般用于酶誘導(dǎo)研究、藥物細(xì)胞毒性研究、慢代謝藥物的代謝穩(wěn)定性或產(chǎn)物推斷研究。立沃生物的原代肝細(xì)胞的分離技術(shù)門檻很高，需要特定的實(shí)驗(yàn)室條件和技術(shù)，以及嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理和質(zhì)量控制。

原代肝細(xì)胞是藥物早期研究的金標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞模型。藥物通過肝臟代謝后，大多數(shù)藥物的毒性被消除，但同時(shí)也有一些無毒或低毒的物質(zhì)通過生物轉(zhuǎn)化后轉(zhuǎn)變成有毒甚至毒性更大的物質(zhì)，因此肝臟便必然成為研究藥物毒性的重要target organ。原代肝細(xì)胞即為一個(gè)較好的篩選模型，尤其是在檢測(cè)結(jié)構(gòu)相關(guān)化合物時(shí)，原代肝細(xì)胞的角色更為重要。 人原代肝細(xì)胞是重要的體外模型。人原代肝細(xì)胞在較大程度上保留了細(xì)胞在體內(nèi)organ里的功能,各種物質(zhì)代謝功能和酶活性與體內(nèi)的肝細(xì)胞極其相似,是較為接近臨床的一種標(biāo)準(zhǔn)體外短期培養(yǎng)模型。人原代肝細(xì)胞通常從肝或肝組織中獲得,一般在肝切除手術(shù)中或者肝移植后排斥的肝組織中獲取,隨后即時(shí)進(jìn)行研究或者凍存待用。 原代肝細(xì)胞是肝臟疾病的研究以及相應(yīng)藥物的開發(fā)的重要載體。比如一些對(duì)于乙肝病毒的研究需要對(duì)肝細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)；一些嚴(yán)重肝臟疾病的細(xì)胞移植研究也要涉及到對(duì)原代肝細(xì)胞進(jìn)行大量擴(kuò)增。因此，原代肝細(xì)胞的體外培養(yǎng)和研究是一直以來科學(xué)家們關(guān)注的熱點(diǎn)。立沃生物的原代肝細(xì)胞配套提供多種細(xì)胞培養(yǎng)輔助試劑，包括細(xì)胞復(fù)蘇、鋪板、維持培養(yǎng)基和添加劑等。北京食蟹猴原代肝細(xì)胞培養(yǎng)步驟

人原代肝細(xì)胞的獲取和保存非常困難，且存在批次差異和有限的增殖能力，因此在實(shí)際應(yīng)用中受到了一定的限制。東莞樹鼩原代肝細(xì)胞培養(yǎng)技巧

    原代肝細(xì)胞比較常用的模型是二維模型。在膠原包被的培養(yǎng)板上，原代肝細(xì)胞可貼壁培養(yǎng)，同樣高密度培養(yǎng)有助于肝細(xì)胞分化狀態(tài)的維持。但原代肝細(xì)胞在體外的培養(yǎng)時(shí)間較短，人原代肝細(xì)胞在體外培養(yǎng)3天內(nèi)可保持乙肝病毒易感性，培養(yǎng)兩周發(fā)生明顯的去分化以及細(xì)胞凋亡情況。北京大學(xué)鄧宏魁教授發(fā)表在《科學(xué)》上的數(shù)據(jù)顯示，通過添加5種小分子化合物抑制原代肝細(xì)胞去分化進(jìn)程，可在體外長(zhǎng)期維持肝細(xì)胞的分化狀態(tài)，維持時(shí)間長(zhǎng)達(dá)八周。那為什么原代肝細(xì)胞在體外容易去分化呢？肝細(xì)胞在體外缺乏了肝細(xì)胞與肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞的交流，又或者缺乏了肝臟的三維結(jié)構(gòu)?；谝陨蠁栴}與分析，我在碩士期間開展了肝細(xì)胞與肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞的共培養(yǎng)工作。結(jié)果顯示，通過共培養(yǎng)，原代肝細(xì)胞可在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，并在鋪板后的72天內(nèi)仍然保持了乙肝病毒的易感性，說明缺乏細(xì)胞間交流是原代肝細(xì)胞發(fā)生去分化的原因之一。到目前為止，原代肝細(xì)胞體外維持四個(gè)月的時(shí)間記錄仍然沒有被打破。 東莞樹鼩原代肝細(xì)胞培養(yǎng)技巧