細胞凍存秘籍：程序1.凍存前檢查凍存前，細胞應處于指數(shù)生長期，確保細胞處于健康狀態(tài)。理想情況下，應在收獲細胞前24小時更換培養(yǎng)基。建議對培養(yǎng)物進行微生物污染物，特別是支原體的檢測，并通過適當?shù)姆椒?，如STR分析確定其身份。如果在培養(yǎng)過程中使用物品，那么建議在冷凍前1到2周不使用物品，這樣如果出現(xiàn)污染，可以更容易地發(fā)現(xiàn)。2.收集細胞通常，您可以使用常規(guī)細胞傳代的實驗程序來收獲細胞。細胞收獲期間盡可能溫和操作。本程序推薦的試劑量是針對為75平方厘米（T-75）培養(yǎng)瓶；若使用其他培養(yǎng)容器，請相應調(diào)整所用試劑量。A.使用無菌吸管，取出并丟棄培養(yǎng)基。請妥善處置與細胞接觸的任何材料和溶液。B.用5到10mlCMF-PBS沖洗細胞，去除所有痕量的血清。C.加入3到5ml的胰酶（在CMF-PBS中），37℃孵育。預熱酶溶液通常會縮短處理時間。無血清凍存液注意事項：若需長期凍存細胞，請轉(zhuǎn)移至液氮罐中貯存。蘇州無血清細胞凍存液廠家

無血清快速細胞凍存液凍存細胞復蘇方法：1、從冰箱里取出細胞冷凍保存管，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2、待凍存管中細胞混合液完全融化后，立即加入1ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻。3、離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min），移去上清液。4、清洗細胞，充分洗凈殘留凍存液。5、加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后，將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。6、鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng)。合肥重慶無血清細胞凍存液無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能：既適用于一般培養(yǎng)細胞的凍存，也適用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞的凍存。

細胞凍存的基本原理：細胞代謝過程需要各種蛋白酶的參與，而這些蛋白酶在環(huán)境溫度低于-70℃時會集體不工作，低溫貯藏的目的是通過較低溫使細胞代謝活動近乎停止。細胞因此進入休眠狀態(tài)，使細胞“不會老”，所以可以長期保存。因為凍融過程對所有細胞和組織都是有一定傷害的，因此，需要開發(fā)出有效的技術來防止細胞死亡和損傷。低溫保護劑可保護細胞不受細胞內(nèi)冰凍影響，目前多采用DMSO，甘油，乙二醇和丙二醇等滲透型低溫保護劑。它們的作用機制包括：自由進入細胞，取代水，使冰點下降，充當鹽的二次溶劑，提高細胞膜對水的通透性。

細胞凍存：就凍存細胞而言，為了防止細胞在溫度下降時產(chǎn)生胞內(nèi)細微冰晶，其溫度的下降不能太快。標準的操作是每一分鐘下降一度。有以下三種建議：（1）優(yōu)先推薦使用程控降溫儀。（2）其次，加有異丙醇的細胞凍存盒，基本上也可以保證每分鐘1℃左右的降溫速度；（3）還有一些普遍的簡易凍存方法。如4℃半小時，-20℃半小時，然后-80℃過夜，再放入液氮；用泡沫盒（裝15mL離心管的那種）加一個保鮮袋，直接放在-80℃凍存；也可以用紗布做成袋子，將細胞懸掛在液氮上方，隔天轉(zhuǎn)入液氮；在凍存管外面包上棉花，直接放在-80℃冰箱就能夠達到緩慢降溫的效果；有的時候如果確實比較緊急的話，向96孔凍存盒的內(nèi)部加滿自來水，再將凍存管放置孔中，直接置于-80℃，這樣也能夠達到緩慢降溫的目的。無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能：不含動物來源性蛋白，能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染。

密度過高會讓細胞沒有足夠的生存空間，密度過低會讓細胞無法互相連接健康生長。建議大家在細胞接種前，一定要調(diào)整好適合細胞生長的濃度，提高細胞的存活率。溫度控制不達標慢凍快融是細胞凍存復蘇的關鍵詞之一。常規(guī)的凍存操作中，都會要求嚴格的梯度降溫，常見的是-4℃→-20℃至-40℃→-80℃→液氮，一定要避免溫度原因?qū)е录毎匀。怀鞘褂昧顺煞纸?jīng)過優(yōu)化、經(jīng)過嚴格測試的凍存液，才能免去程序降溫這個繁瑣的步驟。保存的時候也要保證整個細胞都是處于液氮的液面下方，避免溫度對細胞存活的影響。無血清細胞凍存液：一些保護劑不能穿透細胞，但可以在冰晶形成之前，優(yōu)先結(jié)合細胞外的水分子。合肥無血清細胞凍存液產(chǎn)品介紹

存細胞時需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液。蘇州無血清細胞凍存液廠家

使用方法：1)細胞超凈臺無菌環(huán)境，1.5mlEP管內(nèi)加入細胞混懸劑均勻混懸細胞，細胞終濃度為5×106個/ml，混懸液體積為200μl。細胞凍存劑冰水混合物中預冷，逐滴加入細胞凍存劑800μl，細胞混懸劑與細胞凍存劑的體積比控制在1:4。2)開啟程序性降溫，降溫速率為1℃/min，較后降溫至-80℃以下進行凍存。將比較例1凍存后細胞的復蘇率與實施例5凍存后細胞的復蘇率進行對比，具體結(jié)果如附圖1所示，可見采用本發(fā)明的凍存方法能夠明顯提高細胞的復蘇率。其他實施例通過與比較例1進行比較，也得到相同的試驗結(jié)果。本發(fā)明的凍存方法不僅可以明顯提高凍存后細胞復蘇率，同時還可減少不同批次細胞凍存復蘇率不穩(wěn)定、以及避免由血清中的支原體，細菌，朊細菌及其他細菌顆粒引發(fā)的污染。蘇州無血清細胞凍存液廠家