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碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺(EDC/NHS)方法在羧基磁珠表面偶聯(lián)抗體,制備可高效分離細胞的免疫磁珠.方法用EDC和NHS活化磁珠表面羧基,活化的羧基再與抗體上氨基進行反應,從而將抗體偶聯(lián)于磁珠表面,獲得免疫磁珠.使用高性能納米粒度分析儀(HPPS),二辛可酸(BCA)蛋白定量試劑盒,流式細胞儀,透射電鏡(TEM)表征磁珠的粒徑,磁珠表面聯(lián)接的抗體量及其免疫活性.結果HPPS檢測磁珠平均水力學粒徑為110nm;磁珠表面偶聯(lián)52.4μg抗CD11a+抗體/mg磁珠.經(jīng)磁分離后細胞的流式分析結果表明,CD11a+免疫磁珠可以有效分離髓系白血病細胞系(KG-1a)細胞,免疫磁珠均勻結合于細胞表面,...

免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來源多能成體祖細胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個核細胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負分選,錐蟲藍拒染實驗計數(shù)MACS分選前后細胞活力.流式細胞儀鑒定分選后細胞純度;流式細胞儀分析培養(yǎng)細胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達情況.結果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細胞生長良好...

抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,并進行初步應用。方法采用B淋巴細胞雜交瘤技術制備抗熒光素單克隆抗體;制備腹水,經(jīng)50%硫酸銨粗提后,再經(jīng)陰離子交換樹脂DE52進一步純化單克隆抗體;采用氧化共沉淀法制備納米磁性粒子;乳液聚合法制備羧基磁性微球;用碳二亞胺將抗熒光素單克隆抗體共價偶聯(lián)于磁性微球表面,制備抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠。用制備的免疫磁珠檢測乙肝表面抗原,并與市售ELISA試劑盒的檢測結果進行比較。結果共獲得5株雜交瘤細胞株,其中1F12細胞株分泌的抗體效價、相對親和力較高,特異性較好;純化的1F12株單抗的純度達95%,蛋白含量為2.4mg/ml,ELISA效價為106,相對親和力為0.2m...

偶聯(lián)單抗NJ001的免疫磁珠對肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描的增強作用.方法:經(jīng)尾靜脈注射SPC-A1-luc細胞建立肺腺*裸鼠模型,生物發(fā)光成像定量監(jiān)測**的大小.裸鼠分為:生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組,每周分別注射生理鹽水,750nm裸磁珠溶液和偶聯(lián)NJ001的750nm免疫磁珠溶液,于注射前和注射后4h進行micro-CT掃描.利用免疫組織化學驗證**組織中NJ001特異性抗原SP70的表達.結果:免疫磁珠組在第4周即可檢測到**,而生理鹽水組和裸磁珠組均到第6周才能檢測到.第6周生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組micro-CT掃描**的灰度值分別為注射前的59.05±0.66,...

免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細胞,獲得同質性骨髓基質干細胞.方法:實驗于2004-06/2005-06在東南大學修復重建外科研究所實驗室完成.采集正常自愿獻髓者骨髓,淋巴細胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細胞,研究其生長曲線,體外擴增能力,集落形成能力,細胞表型,細胞周期,成骨能力.結果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細胞貼壁生長,相差顯微鏡下STRO-1^+細胞呈成纖維細胞梭形外觀.②生長曲線可分為細胞生長延滯期,對數(shù)生長期及穩(wěn)定期,細胞倍增時間為57h.③STRO-1^+細胞可以在體外擴增1...

免疫磁珠法(MiniMACS)在分離純化外周血CD4+和CD8+T淋巴細胞亞群中的應用.方法:應用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞(Peripheralbloodmononucleatecells,PBMC),采用MiniMACS分別分離和純化39例標本外周血PBMC中的CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞,并經(jīng)流式細胞儀分析細胞純度和臺盼藍染色的方法對細胞活力進行評估.結果:MiniMACS分離外周血CD4+T淋巴細胞前,后細胞純度分別為(37.38±5.74)%,(97.75±1.03)%(P〈0.001),CD8+T淋巴細胞分離純化前后細胞純度分別為(20.11±6.83)%,(96...

分離轉基因小鼠骨髓造血干細胞.運用針對小鼠干細胞表面特異表達的干細胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細胞,用流式細胞術(FACS)檢測MACS分離后骨髓細胞中干細胞(Sca-1陽性細胞)比例,監(jiān)測細胞分選效果.結果顯示MACS分離后骨髓細胞中Sca-1陽性細胞所占比例達85%以上,涂片觀察發(fā)現(xiàn)細胞組成和細胞形態(tài)學特征與FACS所得結果一致.MACS可以從轉基因小鼠全骨髓細胞中分離出Sca-1陽性的骨髓造血干細胞,細胞純度可達85%以上.BEENbio Anti Myc Co-...

常見問題及對策5：磁珠在使用過程中出現(xiàn)結塊現(xiàn)象？磁珠在使用時如果出現(xiàn)結塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散，容易導致分布不均，出現(xiàn)該問題的原因是磁珠在磁場中放置太久而使磁珠牢固的結合在一起。用超聲波水浴處理2min即可打散磁珠使其重新分散，但應注意超聲處理也會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落，所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。緩沖液匯總Co-IP&CHIP磁珠緩沖液匯總：細胞裂解液：正常RIPA細胞裂解緩沖液(一般是公司購買)抗體磁珠結合buffer：PBST(1*PBS+1%TritonX-100)Washingbuffer:PBST(1*PBS+1%TritonX-100)抗原與抗體/磁珠復合物bi...

免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來源多能成體祖細胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個核細胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負分選,錐蟲藍拒染實驗計數(shù)MACS分選前后細胞活力.流式細胞儀鑒定分選后細胞純度;流式細胞儀分析培養(yǎng)細胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達情況.結果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細胞生長良好...

羥基淀粉沉淀去除臍血紅細胞和免疫磁珠(MACS)陽性選擇,建立富集,分離臍血CD34+細胞的簡易實用方法,通過造血祖細胞集落培養(yǎng)分析其在細胞因子作用下的增殖潛能,觀察羥基淀粉沉淀對造血細胞增殖功能的影響.方法:采用羥基淀粉沉淀和改進的MACS富集,分離臍血CD34+細胞,以甲纖半固體造血細胞培養(yǎng)法觀察其粒-單系細胞(CFU-GM)和紅系爆式集落(BFU-E)的數(shù)量和特性.結果:臍血分離前,CD34+細胞純度為1.5%～3%,MACS分離后其純度可達85%,羥基淀粉沉淀和MACS分離可達91%;CD34+造血祖細胞培養(yǎng)有明顯的增殖,采用IL-3,IL-6,SCF,GM-CSF,EPO等細胞因子組...

常用的磁珠法DNA提取試劑盒，國外的有Dynal、Qiagen等，國內將磁珠應用于核酸提取的研究起源于02年左右，經(jīng)過近些年的反復試驗，形成了穩(wěn)定的核酸提取體系，并已被***用于一些疾病（如乙肝、丙肝、結核菌）等的定量檢測（如惠爾納米的系列磁珠法核酸提取試劑盒）。國產(chǎn)磁珠法試劑盒與進口產(chǎn)品相比，已不單單是只具有價格優(yōu)勢，其產(chǎn)品的穩(wěn)定性、高效性、提取出的核酸的質量與產(chǎn)量都足以與進口磁珠法試劑盒媲美。但是進口試劑盒長期以來形成的完善的銷售渠道對國產(chǎn)試劑盒的推廣是一大挑戰(zhàn)。買免疫磁珠就找上海普平生物科技有限公司！河南anti-Flag COIP免疫磁珠送貨上門免疫磁珠用多聚抗原肽(multiplea...

磁珠與抗體偶聯(lián)的比較好條件,制備抗單增李斯特菌免疫磁珠;將免疫磁珠與顯色培養(yǎng)法結合,初步建立起利用免疫磁珠分離技術對單增李斯特菌進行分離鑒定的檢測方法.從而為食品中單增李斯特菌的檢測提供一種快速,高效和靈敏的檢測新方法.方法:以單增李斯特菌體作為免疫抗原,免疫新西蘭兔,獲得兔抗單增李斯特菌多克隆抗體,鑒定多抗活性以及與單增李斯特菌體的結合能力;用激光粒度儀和透射電鏡分析不同活性基團修飾磁珠的粒徑大小和分散性,選擇性質穩(wěn)定的磁珠用以制備免疫磁珠;設計正交試驗,摸索pH,溫度,時間對氨基修飾磁珠與多抗偶聯(lián)的影響,選擇比較好條件制備免疫磁珠并用于捕獲單增李斯特菌;設計不同的偶聯(lián)緩沖溶液,偶聯(lián)時間,偶...

免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細胞,獲得同質性骨髓基質干細胞.方法:實驗于2004-06/2005-06在東南大學修復重建外科研究所實驗室完成.采集正常自愿獻髓者骨髓,淋巴細胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細胞,研究其生長曲線,體外擴增能力,集落形成能力,細胞表型,細胞周期,成骨能力.結果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細胞貼壁生長,相差顯微鏡下STRO-1^+細胞呈成纖維細胞梭形外觀.②生長曲線可分為細胞生長延滯期,對數(shù)生長期及穩(wěn)定期,細胞倍增時間為57h.③STRO-1^+細胞可以在體外擴增1...

常見問題及對策3：如何避免磁珠在儲存或使用過程中可能出現(xiàn)的聚集情況？磁珠應保存在2～8℃，使用時應避免由于污染而導致的不可逆聚集，或因干燥而導致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發(fā)生聚集屬于正?，F(xiàn)象，不影響磁珠的正常使用。在Bindingbuffer和Elutionbuffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、Tween-20或TritonX-100）可有效防止磁珠聚集。經(jīng)過低pH洗脫操作的磁珠可以用結合緩沖液洗滌至中性，然后用含有0.1%(v/v)Tween-20的Trisbuffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠，并用超聲波水浴處理2min，即可使磁珠恢復均勻狀態(tài)...

兔前軟骨干細胞PSCs,(precartilagiousstemcells)的分離,培養(yǎng)方法及增殖,表型特征,為細胞移植***椎間盤退變,提供合適的種子細胞.[方法]取胎兔骨骺周圍軟骨膜(LaCroix環(huán))中的細胞進行原代培養(yǎng),然后采用免疫磁珠分離系統(tǒng)分選純化PSCs.體外培養(yǎng),傳代,凍存復蘇,繪制生長曲線,觀察細胞特性.分別采用免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定純化后的PSCs.[結果]免疫磁珠分離可獲得純度較高的兔PSCs,培養(yǎng)后成活率高,細胞狀態(tài)良好.細胞凍存復蘇后,細胞增殖速度,細胞形態(tài)及表面標志物無明顯變化.免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定后,細胞都有明顯的PSCs...

免疫磁珠(Immunomagneticbeads,IMB),是由載體微球和免疫配基結合而成的一種納米級材料.免疫磁珠分離技術是以高均一性的磁性微球為固相支持物,將免疫配基(如抗體,抗原等)通過功能基團結合到磁性載體上形成免疫磁性微球,利用特異性的免疫學反應,在磁力作用下,發(fā)生力學移動,從混合溶液中分離出特異性的靶物質.具有分離速度快,效率高,可重復性好,操作簡單,不需要昂貴的儀器設備等優(yōu)點.本實驗采用化學共沉淀的方法合成了納米級Fe3O4磁性微粒,具有顆粒均一程度高,懸浮穩(wěn)定性好,超順磁性等特點,經(jīng)固體物含量的測定及其粒徑的測定,磁珠的濃度約為7.9mg/mL,粒徑約為30～100nm左右,對...

檢測EPCAM、MUC16兩種抗原在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細胞中表達的相關性。方法分別用羧基磁珠制備EPCAM、MUC16兩種免疫磁珠,分3組:EPCAM免疫磁珠檢測組、MUC16免疫磁珠檢測組、2種磁珠均等混合檢測組。對來源于同一患者的等體積外周血樣本進行循環(huán)腫瘤細胞檢測,HE染色后鑒定檢測值。結果EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+MUC16免疫磁珠對同體積、同來源樣本檢測值分別為22±11、14±6、28±12個腫瘤細胞(P0.05),說明檢測效率有統(tǒng)計學差異。結論MUC16與EPCAM在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細胞中**表達且存在差異,因此增加MUC16這一***標志物可有效...

建立檢測人血清抗白***烯醇化酶(Eno)IgG類抗體的免疫磁珠法,并評估其在***血癥診斷中的價值。方法將Eno重組蛋白耦聯(lián)至磁性微珠上,以辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗人IgG為二抗,優(yōu)化免疫磁珠法的反應條件,考察其精密度和特異性。收集經(jīng)血培養(yǎng)確診的***血癥患者(n=113)、***定植者(n=50)、細菌菌血癥患者(n=30)和健康人對照者(n=100)血清,用免疫磁珠法測定抗Eno抗體,并與ELISA法結果進行比較。結果免疫磁珠法測定抗Eno抗體的批內、批間變異系數(shù)(CV)分別為8.2%和14.2%,重組Eno抗原對相應抗體的阻斷率為91.6%。以吸光度(A)值0.29為cuto...

抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,并進行初步應用。方法采用B淋巴細胞雜交瘤技術制備抗熒光素單克隆抗體;制備腹水,經(jīng)50%硫酸銨粗提后,再經(jīng)陰離子交換樹脂DE52進一步純化單克隆抗體;采用氧化共沉淀法制備納米磁性粒子;乳液聚合法制備羧基磁性微球;用碳二亞胺將抗熒光素單克隆抗體共價偶聯(lián)于磁性微球表面,制備抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠。用制備的免疫磁珠檢測乙肝表面抗原,并與市售ELISA試劑盒的檢測結果進行比較。結果共獲得5株雜交瘤細胞株,其中1F12細胞株分泌的抗體效價、相對親和力較高,特異性較好;純化的1F12株單抗的純度達95%,蛋白含量為2.4mg/ml,ELISA效價為106,相對親和力為0.2m...

COIP實驗步驟第三步：免疫共沉淀根據(jù)不同的抗體結合方式，這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同，但是本質是一樣的，都是為了形成抗原-蛋白復合物。如果直接使用 Protein A/G 結合的 beads，先進行細胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育，再加入 beads 將蛋白-抗體復合物拉下來。如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定，或者直接將抗體固定在 beads，則將固定抗體的 beads 與細胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ，可以降低非特異性結合，以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。第四步：洗脫與檢...

一種免疫磁珠及制作方法和用于檢測的方法及測試板,所述的免疫磁珠至少由磁性載體微球組成,該磁性載體微球結合有至少一種免疫配基;所述的磁性載體微球由磁性納米粒和高分子骨架材料組成,其**為金屬小顆粒,**外為高分子材料,**外層為帶有各種可以結合不同免疫配基功能基因的功能層;免疫磁珠的制作方法包括:磁珠預處理;活化磁珠;偶聯(lián)抗體的制作;對偶聯(lián)抗體用封閉液封閉;免疫磁珠純化等;用于檢測的方法是:利用免疫學反應夾心法,競爭法以及間接法檢測不同物質的存在,并在測試板上設置對照體系:測試板由包被試紙條,偶聯(lián)墊,樣品墊,吸水墊,覆蓋膜以及測試板外卡組成,它具有靈敏度高,定量準確,不受光學因素干擾,磁信號穩(wěn)定...

常見問題及對策5：磁珠在使用過程中出現(xiàn)結塊現(xiàn)象？磁珠在使用時如果出現(xiàn)結塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散，容易導致分布不均，出現(xiàn)該問題的原因是磁珠在磁場中放置太久而使磁珠牢固的結合在一起。用超聲波水浴處理2min即可打散磁珠使其重新分散，但應注意超聲處理也會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落，所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。緩沖液匯總Co-IP&CHIP磁珠緩沖液匯總：細胞裂解液：正常RIPA細胞裂解緩沖液(一般是公司購買)抗體磁珠結合buffer：PBST(1*PBS+1%TritonX-100)Washingbuffer:PBST(1*PBS+1%TritonX-100)抗原與抗體/磁珠復合物bi...

免疫磁性細胞分選系統(tǒng)分離純化骨髓衍生肝干細胞亞群c-Kit^+lin^-。方法:實驗于2006—07/08在南方醫(yī)科大學實驗動物中心完成。6~8周齡的SPF級純系BALB,C雄性小鼠10只,體質量18~20g。收集小鼠股骨骨髓細胞,利用免疫磁性細胞分選系統(tǒng),通過兩步法分選純化c-Kit^+lin^-:將獲取的lin^-細胞懸液8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按80μL/10^7加入Buffer重懸細胞。按20μL/10^7加生物素抗體磁珠,混勻,4℃冰箱孵育15min,按1 mL/10^7加入Buffer洗細胞1次,8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按50...

建立免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質瘤干細胞的方法.方法將術中取得的腦膠質瘤標本,通過剪切、消化和吹打成單細胞懸液,篩網(wǎng)過濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133+細胞,用神經(jīng)干細胞無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細胞克隆能力的細胞球,取第3代進行誘導分化,分化前后用免疫細胞熒光化學方法鑒定**干細胞及分化后細胞.結果免疫磁珠分選出的CD133-細胞,可懸浮生長并形成神經(jīng)干細胞樣細胞球,有較強的增殖能力,干細胞標志物巢蛋白(nestin)陽性,分化后細胞表達神經(jīng)元小管相關蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質細胞膠質纖維酸性蛋白質(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白、CD133陰性,并具有**的核型.結...

羥基淀粉沉淀去除臍血紅細胞和免疫磁珠(MACS)陽性選擇,建立富集,分離臍血CD34+細胞的簡易實用方法,通過造血祖細胞集落培養(yǎng)分析其在細胞因子作用下的增殖潛能,觀察羥基淀粉沉淀對造血細胞增殖功能的影響.方法:采用羥基淀粉沉淀和改進的MACS富集,分離臍血CD34+細胞,以甲纖半固體造血細胞培養(yǎng)法觀察其粒-單系細胞(CFU-GM)和紅系爆式集落(BFU-E)的數(shù)量和特性.結果:臍血分離前,CD34+細胞純度為1.5%～3%,MACS分離后其純度可達85%,羥基淀粉沉淀和MACS分離可達91%;CD34+造血祖細胞培養(yǎng)有明顯的增殖,采用IL-3,IL-6,SCF,GM-CSF,EPO等細胞因子組...

免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細胞,獲得同質性骨髓基質干細胞.方法:實驗于2004-06/2005-06在東南大學修復重建外科研究所實驗室完成.采集正常自愿獻髓者骨髓,淋巴細胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細胞,研究其生長曲線,體外擴增能力,集落形成能力,細胞表型,細胞周期,成骨能力.結果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細胞貼壁生長,相差顯微鏡下STRO-1^+細胞呈成纖維細胞梭形外觀.②生長曲線可分為細胞生長延滯期,對數(shù)生長期及穩(wěn)定期,細胞倍增時間為57h.③STRO-1^+細胞可以在體外擴增1...

利用免疫磁珠法分選并鑒定人前列腺*類干細胞.方法利用免疫磁珠法從人前列腺*細胞株PC3中分選CD133+/CD44+細胞,通過免疫組化,流式細胞術,CCK8,平板克隆形成實驗及裸鼠成瘤實驗鑒定其表面標志物表達情況及**干細胞特性.結果經(jīng)免疫磁珠法分選所得CD133+/CD44+細胞比例為0.50%;免疫組化及流式顯示其CD44/CD133/整合素α2β1均高表達;其細胞增殖和克隆形成率高于PC3細胞;以低密度注射時,其裸鼠體內成瘤率明顯高于PC3細胞.結論利用免疫磁珠法可從人前列腺*細胞株PC3中高效的分選出具有**干細胞生物學特性的前列腺*類干細胞.您喜歡免疫磁珠的這些特點嗎？安徽anti-...

建立檢測人血清抗白***烯醇化酶(Eno)IgG類抗體的免疫磁珠法,并評估其在***血癥診斷中的價值。方法將Eno重組蛋白耦聯(lián)至磁性微珠上,以辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗人IgG為二抗,優(yōu)化免疫磁珠法的反應條件,考察其精密度和特異性。收集經(jīng)血培養(yǎng)確診的***血癥患者(n=113)、***定植者(n=50)、細菌菌血癥患者(n=30)和健康人對照者(n=100)血清,用免疫磁珠法測定抗Eno抗體,并與ELISA法結果進行比較。結果免疫磁珠法測定抗Eno抗體的批內、批間變異系數(shù)(CV)分別為8.2%和14.2%,重組Eno抗原對相應抗體的阻斷率為91.6%。以吸光度(A)值0.29為cuto...

常見問題及對策5：磁珠在使用過程中出現(xiàn)結塊現(xiàn)象？磁珠在使用時如果出現(xiàn)結塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散，容易導致分布不均，出現(xiàn)該問題的原因是磁珠在磁場中放置太久而使磁珠牢固的結合在一起。用超聲波水浴處理2min即可打散磁珠使其重新分散，但應注意超聲處理也會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落，所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。緩沖液匯總Co-IP&CHIP磁珠緩沖液匯總：細胞裂解液：正常RIPA細胞裂解緩沖液(一般是公司購買)抗體磁珠結合buffer：PBST(1*PBS+1%TritonX-100)Washingbuffer:PBST(1*PBS+1%TritonX-100)抗原與抗體/磁珠復合物bi...

免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來源多能成體祖細胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個核細胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負分選,錐蟲藍拒染實驗計數(shù)MACS分選前后細胞活力.流式細胞儀鑒定分選后細胞純度;流式細胞儀分析培養(yǎng)細胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達情況.結果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細胞生長良好...